噻唑藍標準品接種和培養過程,都要怎么樣進行
更新時間:2022-07-29 點擊次數:127次
噻唑藍標準品用途常用于基于MTT檢測方法的細胞活力、細胞增殖或細胞毒性檢測。因為MTT具有正電荷,它可以穿過細胞膜并被線粒體還原形成紫色甲臜染料。溶解MTT甲臜染料需要使用有機溶劑。脫氫酶的檢測,染色法。
MTT,商品名稱噻唑藍
全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo(z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide漢語化學名為3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,一種黃顏色的染料,由于應用于細胞存活率的檢測而被熟知。在細胞培養中,MTT不僅僅是一個化學物品,更是一種實驗方法。
MTT原理
MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶標儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
噻唑藍標準品的實驗步驟:
1:接種細胞:用含10%胎小牛血清得培養液配成單個細胞懸液,以每孔1000-10000個細胞接種到96孔板,每孔體積200ul.
2:培養細胞:同一般培養條件,培養3-5天(可根據試驗目的和要求決定培養時間)。
3:呈色:培養3-5天后,每孔加溶液(5mg/ml用PBS配制,pH=7.4)20ul.繼續孵育4h
終止培養,小心吸棄孔內培養上清液,對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內培養上清液。每孔加150ulDMSO,振蕩10min,使結晶物充分融解。
4:比色:選擇490nm波長,在酶標儀上測定各孔光吸收值,記錄結果,以時間為橫坐標,吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。